带你认识流式细胞术PART 1

更新时间：2025-11-18

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一、流式检测的原理

•特定波长的激光束照射到液流内的细胞，产生的光信号被多个接收器接收，通过计算机分析软件量化这些信号。

•根据接收到信号的强弱波动来反映出每个细胞的物理化学特征。

•这些光信号大体可以分为两类：一类是散射光信号，另一类是荧光信号；

其中散射光信号又分成2类：

•一类是在激光直线方向上接受到的散射光信号（前向角散射FSC，forward scatter：表示细胞大小）

•另一类是垂直方向上接收到的散射光信号（侧向角散射SSC，side scatter：表示细胞内复杂程度）。

流式细胞术是在流式细胞仪上操作的，根据其功能不同可以分为分析型流式细胞仪和分选型流式细胞仪，后者不仅可以分析还能分选纯化目标细胞
流式细胞术以光信号为基础定量检测细胞物理化学特征，样品细胞只有标记荧光染料或者荧光素偶联抗体进而被特定波长的激光照射后才能发射特定波长的荧光信号，否则只能分析散射光得到FSC及SSC值
流式细胞术检测对象是细胞（呈独立状态悬浮于液体中），必须先用各种方法将脏器或组织制备成单细胞悬液，然后标记上荧光素偶联抗体，才能被流式细胞仪检测

只能用于流式分析，细胞样品经流式细胞仪的液流系统被仪器分析后最终进入废液桶，不能回收利用
一定波长的激光束直接照射到高压驱动的液流内的细胞，产生的光信号被多个接收器接收。液流中悬浮的细胞能使激光束发生散射，而细胞上结合的荧光素被激光激发后能够发射波长高于激发光的荧光，从而根据接收到信号的强弱反映出细胞的理化性质。
分析型流式细胞仪主要由3个系统组成，包括液流系统、光路系统和检测分析系统。

流式细胞仪的液流系统由两套紧密联系而又相互独立的液流组成，即鞘液流和样品流。

鞘液流从鞘液桶开始，流经专门的管道进入喷嘴，经喷嘴的小孔形成稳定的可见液流。在没有样品流时（未上样），可见液流都是鞘液流（管路自我清洗），最后可见液流通过废液收集孔经废液管道流入废液桶。
鞘液（sheath）有专门的配方，各流式细胞仪制造公司都会提供专门的鞘液，最基本的特征是等渗，保证处于鞘液中的细胞不会因低渗或高渗而死亡。一般分析型流式细胞仪可用双蒸水代替产品化的专门鞘液。

样品流是上样分析时含有样品细胞的液体流，样品流开始于样品管，经过特定的吸取管道进入喷嘴，然后与鞘液一起从喷嘴口射出形成可见液流，最后经废液孔进入废液桶。

上样分析时鞘液流和样品流的混合液流，虽相互接触但没有混合在一起，而是形成层流。样品流在中间，鞘液流在外围，两者所受压力也不同。一般情况下，样品流压力要高于鞘液流（有利于层流的维持，从而保证可见液流的稳定，保证待分析的细胞一直处于中央的样品流内）。

也称流动室，主要功能是形成非常细的可见液流，使细胞以单个串状形式排列与可见液流中，从而让激光依次照射每个细胞，精确分析所有细胞数据。

喷嘴孔径非常小，根据样品细胞大小不同具有不同规格，一般使用的是70μm的喷嘴。

光路系统由一系列激光器、透镜、滤光片和小孔组成，根据波长不同分离各种光信号，其中滤光片最为重要。

根据功能可以分为长通滤片、短通滤片（初筛）和带通滤片三种。

是流式细胞仪的必需组成原件，不同波长的激光可激发不同的光信号。激光器分类方法很多，分类方法是根据其发射的激光波长来分。

激光器	常用信号/通道分配
488nm蓝激光器	FSC、SSC、FITC、PE-TxRed、PE-Cy5、PE-Cy7
635nm红激光器	APC、APC-Cy7
405nm紫激光器	Cascede Yellow、Cascede Blue/Pafifc Blue
355nm紫外激光器	Hoechst/DAPI、PI
532nm绿激光器	PE、PE-Cy5
560nm黄激光器610nm橙激光器	Red Fluorescent Protein、Katusha等荧光素