实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR，qPCR)是一种在DNA扩增反应中，通过荧光化学物质实时监测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的技术，可对特定核酸序列进行定量分析。一、检测原理实时荧光定量PCR结合了PCR技术和实时荧光检测技术，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化。通过Ct值(扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数)和标准曲线的分析，对起始模板进行定...

MK培养基(巨核细胞专用培养基)通常含有多种蛋白质类生长因子(如TPO、SCF)、维生素、脂质及缓冲体系，其生物活性易受温度、光照、氧化及微生物污染影响。如何在储存过程中较大限度保持其功能稳定性，是实验室与产业化应用中的关键问题。主要降解机制包括：蛋白质变性：TPO等细胞因子在4℃长期存放易聚集失活；反复冻融加速构象改变。氧化损伤：培养基中不饱和脂肪酸和还原性物质(如谷胱甘肽)易被氧化，产生自由基损害因子活性。pH漂移：碳酸氢盐缓冲体系在开盖后易受空气中CO₂影响，导致pH升...

流式分析的应用-细胞群比例测定测定某细胞群体或者亚群的比例是流式细胞术最基本的应用，完成细胞群比例测定需要解决以下两个问题。问题1：明确总体是什么，若要测定CD4T细胞的比例，就首先要明确这个比例是相对于哪一个总体而言的，是占所有T细胞的比例还是占所有淋巴细胞的比例，总体是根据实验具体要求决定的；问题2：明确这个细胞群体的特征表型（相对于总体细胞有什么特点），一般来说就是明确这个细胞群体相对于总体内的其他细胞具有或者缺少哪个特征性的抗原，利用该抗原的相应荧光素偶联抗体，就可以...

巨核细胞(Megakaryocytes,MKs)是骨髓中负责生成血小板的关键细胞，其体外高效诱导分化对于血小板体外生产、疾病建模及药物筛选具有重要意义。然而，传统培养体系存在分化效率低、血小板产量不足等问题，限制了其临床转化应用。因此，优化巨核细胞诱导分化培养基成分，成为提升血小板产率的关键策略。本研究以人源诱导多能干细胞(iPSCs)为起始材料，通过逐步添加细胞因子和小分子化合物，系统评估不同培养基组分对巨核细胞分化及血小板释放的影响。首先，在造血祖细胞诱导阶段，比较了SC...

巨核细胞是骨髓中负责生成血小板的大型多倍体细胞，其成熟过程涉及复杂的形态重塑、DNA复制(内复制)及前血小板延伸。近年来，越来越多的研究表明，线粒体不仅是能量工厂，更在巨核细胞分化与功能调控中扮演关键角色。在巨核细胞早期发育阶段，线粒体数量较少且呈碎片化状态，主要依赖糖酵解供能。随着细胞进入成熟期，特别是启动内复制和细胞质扩增时，对ATP的需求显著上升，线粒体随之发生融合、网络化，并增强氧化磷酸化(OXPHOS)活性。研究表明，线粒体膜电位的维持与巨核细胞多倍体化程度正相关；...

单细胞样品制备样品制备如果研究对象是体外培养的悬浮细胞，则直接收集细胞于离心管中，离心沉淀细胞，然后PBS清洗重悬沉淀，取适量于EP管中，标记染色相应的荧光素偶联抗体，最后洗去未结合的抗体，用适宜体积PBS重悬细胞进行上样；如果培养的细胞是贴壁细胞，需用胰酶消化细胞适当时间后，用培养基或PBS吹打，收集待测细胞，之后同上处理上样检测；荧光标记荧光信号是流式细胞仪接受处理的主要信号；流式细胞仪接收到的荧光信号主要来源于结合在样品细胞上的荧光素；荧光素偶联抗体/染料与细胞结合后就...

一、流式图流式细胞仪分析细胞都是高速的，目前分析速度基本都能达到每秒上万个细胞，每个分析的细胞都能得到几方面的信息，最基本的有FSC、SSC信号，如果再标记荧光素偶联抗体，就会再增加多个荧光信号。为了全面直观反映大量信息，就得采用流式图来显示。流式图有很多种，常用的是流式直方图和散点图，当然还有等高线图等等。流式直方图只能显示一个通道的信息，散点图能显示两个通道的信息，相关分析软件中甚至有能显示三通道信息的3D图。流式直方图流式直方图形成的原理与统计学中直方图相似。其x轴表示...

重组人白介素-11是一种通过基因重组技术制备的促血小板生长因子类药物，主要用于预防和治疗化疗引起的血小板减少症，其作用机制、适用人群、用法用量及不良反应如下：一、作用机制重组人白介素-11通过激活JAK-STAT信号通路，直接刺激骨髓造血干细胞和巨核祖细胞的增殖，诱导巨核细胞成熟分化，促进血小板生成并释放到外周血中，从而提升血小板计数。该药物未改变血小板功能，仅增加其数量。二、适用人群实体瘤及非髓性白血病患者：化疗后出现Ⅲ、Ⅳ度血小板减少症(血小板计数极低)时使用。骨髓移植后...

随着年龄增长，造血干细胞(HSC)功能发生显著退化，表现为自我更新能力下降、髓系偏倚增强、淋巴系输出减少，导致老年人易患贫血、感染及血液肿瘤。机制研究表明，衰老HSC积累DNA损伤、线粒体功能紊乱、表观遗传失调及微环境(niche)信号异常。关键变化包括：干性标志物下调：如CD150⁺CD48⁻比例升高，但功能减弱；ROS水平升高：氧化应激损伤蛋白质与脂质；炎症因子累积：TNF-α、IL-6等促炎信号抑制HSC静息态。针对上述机制，年轻化干预策略不断涌现：代谢重编程：使用NA...

一、流式检测的原理•特定波长的激光束照射到液流内的细胞，产生的光信号被多个接收器接收，通过计算机分析软件量化这些信号。•根据接收到信号的强弱波动来反映出每个细胞的物理化学特征。二、流式细胞术光信号•这些光信号大体可以分为两类：一类是散射光信号，另一类是荧光信号；其中散射光信号又分成2类：•一类是在激光直线方向上接受到的散射光信号（前向角散射FSC，forwardscatter：表示细胞大小）•另一类是垂直方向上接收到的散射光信号（侧向角散射SSC，sidescatter：表示...

类器官技术为模拟人体组织微环境提供了革命性平台，而将造血干细胞(HSC)与血管/骨髓类器官共培养，有望构建“人造骨髓niche”，用于研究造血调控、药物毒性或疾病建模。然而，传统HSC培养基多针对单层悬浮培养设计，难以满足类器官三维结构对营养扩散、信号梯度与基质互作的复杂需求。研究发现，标准HSC培养基(含SCF、TPO、FLT3L)在类器官共培养中存在三大不适配问题：渗透性差：高浓度细胞因子在Matrigel或水凝胶中扩散受限，导致HSC分布不均；信号冲突：类器官分泌的Wn...

原理聚丙烯酰胺凝胶电泳（Polyacrylamidegelelectrophoresis，PAGE），是以聚丙烯酰胺凝胶为支持介质的一种常用电泳技术。SDS（十二烷基硫酸钠）是阴离子表面活性剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，从而破坏蛋白分子间的二、三级结构。而强还原剂如β-巯基乙醇，二硫苏糖醇（DTT）均能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后，分子被解聚成多肽链，解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白-SDS胶束，...