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带你认识流式细胞术PART 1
一、流式检测的原理•特定波长的激光束照射到液流内的细胞,产生的光信号被多个接收器接收,通过计算机分析软件量化这些信号。•根据接收到信号的强弱波动来反映出每个细胞的物理化学特征。二、流式细胞术光信号•这些光信号大体可以分为两类:一类是散射光信号,另一类是荧光信号;其中散射光信号又分成2类:•一类是在激光直线方向上接受到的散射光信号(前向角散射FSC,forwardscatter:表示细胞大小)•另一类是垂直方向上接收到的散射光信号(侧向角散射SSC,sidescatter:表示...
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造血干细胞培养基在类器官共培养体系中的适配性研究
类器官技术为模拟人体组织微环境提供了革命性平台,而将造血干细胞(HSC)与血管/骨髓类器官共培养,有望构建“人造骨髓niche”,用于研究造血调控、药物毒性或疾病建模。然而,传统HSC培养基多针对单层悬浮培养设计,难以满足类器官三维结构对营养扩散、信号梯度与基质互作的复杂需求。研究发现,标准HSC培养基(含SCF、TPO、FLT3L)在类器官共培养中存在三大不适配问题:渗透性差:高浓度细胞因子在Matrigel或水凝胶中扩散受限,导致HSC分布不均;信号冲突:类器官分泌的Wn...
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SDS-PAGE凝胶电泳实验
原理聚丙烯酰胺凝胶电泳(Polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE),是以聚丙烯酰胺凝胶为支持介质的一种常用电泳技术。SDS(十二烷基硫酸钠)是阴离子表面活性剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,从而破坏蛋白分子间的二、三级结构。而强还原剂如β-巯基乙醇,二硫苏糖醇(DTT)均能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白-SDS胶束,...
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IPSC实验
包被液有哪些?Vitronectin玻连蛋白是血清和组织中的关键细胞粘附因子,通过与糖胺聚糖和蛋白聚糖结合,在细胞相互作用中发挥着至关重要的作用。它被特定的整合素识别并作为重要的粘附分子,促进细胞-基质相互作用。Matrigel是一种从小鼠肉瘤中提取的、可溶的基底膜基质。在室温或体温下,它能从液态凝固成凝胶状,为细胞生长提供一个模拟体内真实环境的三维支架。要准备的试剂iPSC培养基ROCK抑制剂EDTA溶液DPBSIPSC复苏预热平板:提前1h取出包被好的平板,室温平衡快速化...
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SDS的用途
SDS是一种阴离子去垢剂,在生物化学和分子生物学领域用途广泛。SDS的用途:蛋白质变性剂:SDS能够断裂蛋白质分子内和分子间的氢键,使蛋白质去折叠,破坏其二、三级结构。在SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)中,SDS与蛋白质结合,使所有蛋白质带上负电荷,且电荷量远超原有电荷,从而消除不同分子间的电荷差异和结构差异,使蛋白质按分子量大小分离。核酸提取:SDS可以裂解细胞膜,释放细胞内的核酸,同时使与核酸结合的蛋白质变性,从而实现核酸与蛋白质的分离。在DNA提取过程中,SDS能...
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无血清造血干细胞培养基中细胞因子组合的优化策略
造血干细胞的体外扩增是细胞治疗、基因疗法和造血重建的关键环节。传统含血清培养体系存在批次不稳定、免疫原性风险和病原体污染隐患,因此,无血清造血干细胞培养基已成为临床级HSC生产的发展方向。在无血清体系中,细胞因子作为调控HSC命运的核心信号分子,其组合与浓度配比的优化至关重要。HSC的自我更新、增殖与分化受多种细胞因子协同调控。目前广泛使用的细胞因子包括干细胞因子(SCF)、血小板生成素(TPO)、FMS样酪氨酸激酶3配体(FLT3-L)和白细胞介素-6(IL-6)等。其中,...
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干细胞培养基中生长因子的作用机制解析
干细胞因其具有自我更新和多向分化潜能,在再生医学、疾病模型构建和药物筛选等领域展现出巨大应用前景。然而,维持干细胞的未分化状态或引导其定向分化,高度依赖于其所处的微环境,其中干细胞培养基中的生长因子扮演着至关重要的调控角色。生长因子是一类具有生物活性的蛋白质或多肽,通过与干细胞表面特异性受体结合,激活细胞内复杂的信号通路,从而精确调控细胞的命运决定。在干细胞培养基中,不同生长因子发挥着独特而协同的作用。例如,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是维持人胚胎干细胞(hESCs)和...
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造血干细胞分离纯化和体外扩增
关于造血干细胞造血干细胞是一种原始未分化的细胞,具有自我更新能力和分化为各类血细胞的潜能。它们负责持续生成红细胞、白细胞、血小板等,维持人体血液系统的正常功能,是治疗血液疾病、免疫缺陷及某些癌症的关键生物资源。骨髓是造血干细胞的主要来源,尤其在成年个体中。骨髓中含有大量造血干细胞,具有长期自我更新和分化成各类血细胞的潜能。骨髓移植是最早应用的造血干细胞移植形式,其优点是干细胞数量充足且植入成功率较高。通过注射粒细胞集落刺激因子(G-CSF)等动员剂,可将骨髓中的造血干细胞释放...
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苏州方舟生物--高性能造血干细胞培养基
苏州方舟生物具备多年造血干细胞培养基研发经验,并获得多项patent,旨在为科研与工业界同仁提供一套切实可行的HSC无血清培养实践方案与避坑指南,助力您的项目降本增效,顺利通关。一、核心操作流程(StandardOperatingProcedure)1.前期准备:无菌是基石环境确认:操作必须在超净工作台或生物安全柜内进行,提前30分钟开启紫外灭菌。试剂复温:将培养基、添加剂等置于室温或4℃冰箱缓慢复温,切勿37℃水浴急热,以免活性降解。试剂配制:按照说明书将方舟生物营养添加剂...
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重组人血小板生成素适应症及用法用量
重组人血小板生成素(rhTPO)是一种通过基因重组技术制成的生物制剂,主要用于治疗血小板减少症。一、作用机制重组人血小板生成素通过与血小板生成素受体(c-Mpl)结合,激活细胞内信号通路(如JAK/STAT、Ras/MAPK、PI3K/Akt等),促进骨髓造血干细胞向巨核细胞分化,并加速血小板的生成和释放。其生物学效应与内源性血小板生成素(TPO)一致,是调节血小板生成的关键因子。二、适应症化疗后血小板减少症适用于实体瘤化疗后血小板计数低于50×10⁹/L,且医生认为有必要升...
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