带你认识流式细胞术PART 2
更新时间：2025-11-28
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一、流式图
流式细胞仪分析细胞都是高速的，目前分析速度基本都能达到每秒上万个细胞，每个分析的细胞都能得到几方面的信息，最基本的有FSC、SSC信号，如果再标记荧光素偶联抗体，就会再增加多个荧光信号。为了全面直观反映大量信息，就得采用流式图来显示。
流式图有很多种，常用的是流式直方图和散点图，当然还有等高线图等等。
流式直方图只能显示一个通道的信息，散点图能显示两个通道的信息，相关分析软件中甚至有能显示三通道信息的3D图。
流式直方图
流式直方图形成的原理与统计学中直方图相似。其x轴表示一个通道的值，y轴表示细胞数量或者信号强度等等。
例：上图中x轴表示FSC信号值，y轴表示位于各区间的细胞数
从上图可以看出，根据FSC信号值的大小（即细胞体积），可以将上述细胞分为两群：一群细胞的大小平均在35左右，占62%；第二群细胞的大小平均在95左右，占38%。
得出结论：这100个细胞由大小明显不同的两群细胞组成，并且小细胞占多数。
流式直方图虽不是如此简单，但基本原理是相同的。流式直方图在统计直方图的基础上，使统计区间不断的缩小，小到甚至可以认为一个值就是一个统计区间，而细胞数量不断增加，致使相邻区间内的细胞数量差不多，这时直方图就好像是由光滑的曲线所围成的。
检测值与实际值差异
性质相同的一个细胞群在流式直方图中是以正态分布曲线的形式出现的，其原因是流式检测值与实际值之间存在着一定的误差。
在大样本条件下，检测值与实际值相符或者偏离实际值越小的概率越大，而检测值偏离实际值越大的概率越小，反映在流式直方图上就表现为正态分布的图形。
流式散点图
流式散点图能够同时表示两个通道的信息。x轴、y轴分别表示两个不同通道的值，图中每个点代表一个细胞，该点所对应的横纵坐标即为该细胞两个通道的信号值。
FSC-SSC散点图
常见的即为FSC-SSC散射光通道散点图，x轴：FSC代表细胞的大小，y轴：SSC代表细胞的颗粒度/形状。该图可以初步根据细胞的大小、颗粒度对细胞进行分群、分类，所以该图又可以称为细胞的“物理图"。
例：上图代表的是正常人外周血白细胞FSC-SSC散点图。可以看出，细胞大致分为三群：红色的是淋巴细胞（T、B、NK细胞等）、绿色的是单核细胞群、黄色的是中性粒细胞群。
门（gate）
门是流式分析中一个非常重要的概念，流式分析时有时不希望所有的样品细胞都显示于流式图中，而希望只显示感兴趣的细胞，排除其他非相关细胞的干扰，使显示的信息更加直观、更具有针对性。
荧光信号散点图
荧光通道表示的是细胞的化学特征。荧光通道接收到信号的强弱，可以反映细胞上结合的荧光素的量，进一步反映细胞上表达某分子的量，最后间接反映细胞表达某分子这一化学特征。
注意：不同于FSC-SSC散点图，FSC和SSC最多相差几倍，而荧光信号强弱之间相差很大，阴阳性细胞之间可以相差几百、几千倍，呈指数形式。所以，FSC-SSC散点图单位数值以“一般数序形式"表示，而荧光通道常以“对数形式"表示。
在流式散点图中，呈典型放射状分布的圆形所代表的是性质相同的细胞群，呈长条形或者椭圆形的则表示该细胞群其中一个参数所代表的的化学性质不相同，很可能存在着表达上的强弱差异。
但是，这里需要指出，通过流式散点图判断细胞群某一性质是否存在差异不如通过流式直方图判断准确，因为，流式散点图中的细胞群的形状受影响的因素有很多，不仅表达强弱差异会影响，通道之间的荧光补偿调节也会直接影响细胞群的形状，从而使原来典型放射状分布的圆形变成长条形，流式分析时需要综合考虑这些因素。
