高效表达重组人干细胞因子的CHO细胞株构建与筛选
更新时间：2026-01-16
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重组人干细胞因子(rhSCF)是支持造血干细胞体外扩增的核心细胞因子，其产量与质量直接决定下游应用成本与效果。中国仓鼠卵巢(CHO)细胞因其人源化翻译后修饰能力，成为rhSCF生产的常选宿主。高效表达细胞株的构建与筛选是工艺开发的关键第一步。
构建策略通常包括：选择强启动子(如CMV或EF-1α)、优化信号肽序列以促进分泌、引入抗凋亡基因(如Bcl-2)延长培养周期，并通过转座子系统(如Sleeping Beauty)或定点整合技术实现稳定高拷贝插入。随后，采用有限稀释法或FACS分选获得单克隆细胞株。
筛选阶段需建立多维评价体系：首先通过ELISA初筛上清中rhSCF浓度；其次利用TF-1细胞增殖实验评估其生物活性；再结合qPCR检测mRNA水平与基因拷贝数相关性；最后在摇瓶或微生物反应器中评估其在补料分批培养下的长期表达稳定性。高产株往往具备高比生产率(qp)与低代谢副产物积累特性。
近年来，CRISPR/Cas9介导的基因组编辑进一步提升了筛选效率，例如敲除蛋白酶基因以减少产物降解，或增强糖基化通路基因以改善重组人干细胞因子稳定性。最终获得的GMP级主细胞库(MCB)需经过全面检定，确保无外源因子污染与遗传稳定性。该过程不仅提升重组人干细胞因子的可及性，也为其他难表达细胞因子的开发提供范式。
