SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)（非还原）技术手册

1. 产品概述

SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液 (5×, Non-Reducing Protein Loading Buffer) 是一种经过高度浓缩的常规蛋白电泳专用预混液。与还原型上样液不同，本产品不含 DTT 或 

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-巯基乙醇等还原剂，专门用于在电泳过程中保持蛋白质分子内部及分子间的二硫键处于完整状态。

本产品包含高纯度的 SDS、甘油、溴酚蓝及 Tris-HCl 缓冲体系。5 倍浓缩的设计允许实验室在上样时加入更小体积的缓冲液，从而增加蛋白质样品的实际加样量。本产品广泛用于研究蛋白质的天然亚基构成、二硫键错配以及抗体整体结构的鉴定。

2. 作用机理

非还原型上样缓冲液通过以下机制实现蛋白质的分离与示踪：

• 变性而不还原： 组分中的 SDS 与热处理协同作用，破坏蛋白质的氢键及疏水键，使蛋白质变性并带上等密度的负电荷。由于不含还原剂，二硫键 (S-S) 不会被打开，多聚体或含有二硫键结合的复合体将以整体形式迁移。

• 增加密度： 甘油 能够显著增加样品的比重，确保样品在加样后沉降至凝胶加样孔底部，避免样品扩散至电泳缓冲液中。

• 实时示踪： 溴酚蓝 作为指示前沿，在电泳过程中提供清晰的蓝色条带，便于实验人员实时监测电泳进度。

• 维持 pH 稳态： Tris-HCl 缓冲系统确保样品在加热及电泳初期的 pH 环境与浓缩胶一致，从而提升条带的锐利度。

3. 产品核心优势

• 二硫键保护： 精确配方确保在变性条件下不破坏蛋白质的共价二硫键，是分析蛋白质折叠、多聚化及抗体结构的“金标准"。

• 高浓缩倍数： 5× 浓缩液最大限度减少了上样缓冲液占用的体积，提升了低浓度样本的检出灵敏度。

• 条带清晰锐利： 采用电泳级超纯原料，有效消除条带拖尾、扩散或背景杂色现象。

• 上样指示明确： 选用高品质溴酚蓝，颜色明亮，在凝胶中迁移一致，不产生干扰条带。

• 稳定性： 经过优化的化学稳定性测试，在室温或 4°C 下短时间存放依然保持性能稳定。

4. 广泛的应用领域

• 蛋白质结构分析： 检测目标蛋白是否存在二硫键交联的多聚体或二聚体。

• 抗体药物研究： 鉴定单克隆抗体（IgG）的完整性及其重链/轻链的连接状态（非还原条件下 IgG 呈现约 150 kDa 的单一条带）。

• 蛋白复合体研究： 考察在变性条件下仍依赖二硫键维持的复合体稳定性。

• Western Blot 预处理： 用于非还原型 Western Blot 实验，检测对构象依赖性较强的抗原表位。

5. 技术参数规格 (Specifications)

6. 使用方法

1. 混合： 按 1:4 的比例将本产品加入到蛋白质样本中（例如：40 μL 样本加入 10 μL 上样缓冲液）。

2. 加热： 混匀后，于 95°C - 100°C 加热 5-10 分钟以充分使蛋白变性。

3. 离心： 冷却至室温后，微速离心数秒，收集冷凝水。

4. 上样： 直接取样进行 SDS-PAGE 电泳。

7. SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)（非还原）质量承诺

我们对每一批次的非还原型上样缓冲液均进行严格的 pH 值校验及电泳条带分辨率测试（以标准 IgG 作为对照）。我们承诺：本产品不含还原组分，能确保蛋白质二硫键的绝对完整。如有任何技术疑问，我们的团队将竭诚为您服务。