（实验服务）Western Blot实验技术服务手册

1. 服务概述

Western Blot (WB) 是分子生物学与细胞生物学研究中经典蛋白检测技术。它通过电泳分离不同分子量的蛋白质，并利用抗体与抗原的特异性结合原理，对样本中的目标蛋白进行定性或半定量分析。

我们提供“从样本到数据"的一站式 Western Blot 技术服务。凭借标准化的操作流程、高灵敏度的显色系统以及专业的灰度分析，我们致力于为客户提供高清晰度、高重复性且符合学术发表标准的实验结果。

2. 实验原理

Western Blot 结合了凝胶电泳的高分辨率和免疫化学的高度特异性：

• 分离： 蛋白质样本在 SDS-PAGE 胶中根据分子量大小进行电泳分离。

• 转移： 将胶上的蛋白电转移至固相载体（PVDF 或 NC 膜）上，并保持其原始排列。

• 封闭： 使用封闭液占据膜上未结合蛋白的位点，减少非特异性背景。

• 杂交： 目标蛋白与特异性一抗结合，随后一抗与标记有酶（如 HRP）或荧光基团的二抗结合。

• 检测： 通过化学发光（ECL）或荧光成像技术使目标带显色，反映蛋白的存在及表达水平。

3. 标准实验流程

1. 样本制备： 提供组织、细胞或各类生物流体的蛋白提取服务，含蛋白酶抑制剂处理。

2. 蛋白定量： 采用 BCA 或 Bradford 法精确测定蛋白浓度，确保等量上样。

3. 电泳与转膜： 优化电泳电压与转膜时间（湿转或半干转），确保不同分子量蛋白的捕获效率。

4. 免疫杂交： 严格控制封闭时间、抗体稀释比例及孵育温度。

5. 显影成像： 使用高灵敏度冷 CCD 成像系统捕捉化学发光信号。

6. 数据分析： 使用 ImageJ 或专业分析软件进行条带灰度值计算，并针对内参（如 GAPDH、β-Actin）进行归一化处理。

4. 服务核心优势

• 高灵敏度与低背景： 优化封闭体系与洗涤条件，确保背景洁净，即便是低丰度蛋白也能清晰成像。

• 严格的质量控制： 每批实验均包含标准化内参对比，确保半定量结果的准确性与样本间的一致性。

• 全流程标准化： 从抗体稀释比例摸索到显影时间控制，均由经验丰富的技术团队操作，有效规避“白板"、“高背景"或“非特异性条带"等常见问题。

• 多样化样本支持： 适配动物组织、植物样本、细胞株、外泌体及血清等多种复杂样本来源。

5. 交付内容 (Deliverables)

6. （实验服务）Western Blot服务质量承诺

我们承诺实验数据的真实性与原始性。针对每一个检测靶点，我们均会进行抗体特异性验证与实验条件优化，确保交付的条带清晰、平整、无拖尾，直接达到 SCI 论文发表水平。我们的技术专家将全程为您提供从实验设计到结果解读的深度支持。