巨核细胞(MK)是血小板的前体细胞，巨核细胞诱导分化对血小板短缺问题具有重大意义。然而，传统分化方案效率低、周期长、个体差异大，亟需建立高通量筛选平台以加速优化进程。该平台通常整合多能干细胞(iPSC或ESC)作为起始材料，通过自动化液体处理系统进行96或384孔板规模的因子/小分子组合测试。关键读出指标包括：CD41⁺/CD42b⁺双阳性率(流式)、多倍体核比例(DAPI染色)、proplatelet形成能力(显微成像)及释放血小板的功能验证。为提升通量，研究者开发了荧光报...

重组人骨形态发生蛋白-4(rhBMP-4)在骨组织再生修复、干细胞分化、疾病机制研究与治疗、心脑血管疾病研究、肿瘤研究等多个方面有应用。重组人骨形态发生蛋白-4具体介绍如下：骨组织再生修复：rhBMP-4具有强大的促成骨和成软骨活性，能够诱导未分化间充质细胞定向分化为成骨细胞，并合成胶原、形成钙化骨组织。在骨科和牙科再生医学中，rhBMP-4被广泛研究用于促进骨折愈合、脊柱融合和骨缺损修复。例如，动物模型研究表明，局部应用rhBMP-4重组蛋白可以加速骨折愈合过程，缩短骨痂形...

重组人干细胞因子(rhSCF)是支持造血干细胞体外扩增的核心细胞因子，其产量与质量直接决定下游应用成本与效果。中国仓鼠卵巢(CHO)细胞因其人源化翻译后修饰能力，成为rhSCF生产的常选宿主。高效表达细胞株的构建与筛选是工艺开发的关键第一步。构建策略通常包括：选择强启动子(如CMV或EF-1α)、优化信号肽序列以促进分泌、引入抗凋亡基因(如Bcl-2)延长培养周期，并通过转座子系统(如SleepingBeauty)或定点整合技术实现稳定高拷贝插入。随后，采用有限稀释法或FAC...

实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR，qPCR)是一种在DNA扩增反应中，通过荧光化学物质实时监测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的技术，可对特定核酸序列进行定量分析。一、检测原理实时荧光定量PCR结合了PCR技术和实时荧光检测技术，在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化。通过Ct值(扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数)和标准曲线的分析，对起始模板进行定...

MK培养基(巨核细胞专用培养基)通常含有多种蛋白质类生长因子(如TPO、SCF)、维生素、脂质及缓冲体系，其生物活性易受温度、光照、氧化及微生物污染影响。如何在储存过程中较大限度保持其功能稳定性，是实验室与产业化应用中的关键问题。主要降解机制包括：蛋白质变性：TPO等细胞因子在4℃长期存放易聚集失活；反复冻融加速构象改变。氧化损伤：培养基中不饱和脂肪酸和还原性物质(如谷胱甘肽)易被氧化，产生自由基损害因子活性。pH漂移：碳酸氢盐缓冲体系在开盖后易受空气中CO₂影响，导致pH升...

流式分析的应用-细胞群比例测定测定某细胞群体或者亚群的比例是流式细胞术最基本的应用，完成细胞群比例测定需要解决以下两个问题。问题1：明确总体是什么，若要测定CD4T细胞的比例，就首先要明确这个比例是相对于哪一个总体而言的，是占所有T细胞的比例还是占所有淋巴细胞的比例，总体是根据实验具体要求决定的；问题2：明确这个细胞群体的特征表型（相对于总体细胞有什么特点），一般来说就是明确这个细胞群体相对于总体内的其他细胞具有或者缺少哪个特征性的抗原，利用该抗原的相应荧光素偶联抗体，就可以...

巨核细胞(Megakaryocytes,MKs)是骨髓中负责生成血小板的关键细胞，其体外高效诱导分化对于血小板体外生产、疾病建模及药物筛选具有重要意义。然而，传统培养体系存在分化效率低、血小板产量不足等问题，限制了其临床转化应用。因此，优化巨核细胞诱导分化培养基成分，成为提升血小板产率的关键策略。本研究以人源诱导多能干细胞(iPSCs)为起始材料，通过逐步添加细胞因子和小分子化合物，系统评估不同培养基组分对巨核细胞分化及血小板释放的影响。首先，在造血祖细胞诱导阶段，比较了SC...

巨核细胞是骨髓中负责生成血小板的大型多倍体细胞，其成熟过程涉及复杂的形态重塑、DNA复制(内复制)及前血小板延伸。近年来，越来越多的研究表明，线粒体不仅是能量工厂，更在巨核细胞分化与功能调控中扮演关键角色。在巨核细胞早期发育阶段，线粒体数量较少且呈碎片化状态，主要依赖糖酵解供能。随着细胞进入成熟期，特别是启动内复制和细胞质扩增时，对ATP的需求显著上升，线粒体随之发生融合、网络化，并增强氧化磷酸化(OXPHOS)活性。研究表明，线粒体膜电位的维持与巨核细胞多倍体化程度正相关；...

单细胞样品制备样品制备如果研究对象是体外培养的悬浮细胞，则直接收集细胞于离心管中，离心沉淀细胞，然后PBS清洗重悬沉淀，取适量于EP管中，标记染色相应的荧光素偶联抗体，最后洗去未结合的抗体，用适宜体积PBS重悬细胞进行上样；如果培养的细胞是贴壁细胞，需用胰酶消化细胞适当时间后，用培养基或PBS吹打，收集待测细胞，之后同上处理上样检测；荧光标记荧光信号是流式细胞仪接受处理的主要信号；流式细胞仪接收到的荧光信号主要来源于结合在样品细胞上的荧光素；荧光素偶联抗体/染料与细胞结合后就...

一、流式图流式细胞仪分析细胞都是高速的，目前分析速度基本都能达到每秒上万个细胞，每个分析的细胞都能得到几方面的信息，最基本的有FSC、SSC信号，如果再标记荧光素偶联抗体，就会再增加多个荧光信号。为了全面直观反映大量信息，就得采用流式图来显示。流式图有很多种，常用的是流式直方图和散点图，当然还有等高线图等等。流式直方图只能显示一个通道的信息，散点图能显示两个通道的信息，相关分析软件中甚至有能显示三通道信息的3D图。流式直方图流式直方图形成的原理与统计学中直方图相似。其x轴表示...

重组人白介素-11是一种通过基因重组技术制备的促血小板生长因子类药物，主要用于预防和治疗化疗引起的血小板减少症，其作用机制、适用人群、用法用量及不良反应如下：一、作用机制重组人白介素-11通过激活JAK-STAT信号通路，直接刺激骨髓造血干细胞和巨核祖细胞的增殖，诱导巨核细胞成熟分化，促进血小板生成并释放到外周血中，从而提升血小板计数。该药物未改变血小板功能，仅增加其数量。二、适用人群实体瘤及非髓性白血病患者：化疗后出现Ⅲ、Ⅳ度血小板减少症(血小板计数极低)时使用。骨髓移植后...

随着年龄增长，造血干细胞(HSC)功能发生显著退化，表现为自我更新能力下降、髓系偏倚增强、淋巴系输出减少，导致老年人易患贫血、感染及血液肿瘤。机制研究表明，衰老HSC积累DNA损伤、线粒体功能紊乱、表观遗传失调及微环境(niche)信号异常。关键变化包括：干性标志物下调：如CD150⁺CD48⁻比例升高，但功能减弱；ROS水平升高：氧化应激损伤蛋白质与脂质；炎症因子累积：TNF-α、IL-6等促炎信号抑制HSC静息态。针对上述机制，年轻化干预策略不断涌现：代谢重编程：使用NA...