苏州方舟生物--高性能造血干细胞培养基

苏州方舟生物具备多年造血干细胞培养基研发经验，并获得多项patent，旨在为科研与工业界同仁提供一套切实可行的HSC无血清培养实践方案与避坑指南，助力您的项目降本增效，顺利通关。

一、核心操作流程（Standard Operating Procedure）

1. 前期准备：无菌是基石

环境确认：操作必须在超净工作台或生物安全柜内进行，提前30分钟开启紫外灭菌。

试剂复温：将培养基、添加剂等置于室温或4℃冰箱缓慢复温，切勿37℃水浴急热，以免活性降解。

试剂配制：按照说明书将方舟生物营养添加剂等组分无菌加入基础培养基中，吹打混匀。配制好的培养基，建议在2-8℃避光保存，并在2周内使用完毕。

2. 细胞接种：密度是关键

解冻复苏：使用程序性降温盒冻存的细胞，复苏时应快速放入37℃水浴，并立即转移到预热的培养基中稀释，离心去除DMSO。

接种密度：对于脐带血（UCB）来源的CD34⁺细胞，推荐初始接种密度为 1-2×105 cells/mL。密度过低则增殖不足，过高则易诱发分化。

3. 培养维持：精细出奇迹

培养环境：置于37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中。尽量减少开关门次数，避免环境波动。

换液频率：每2-3天进行一次半量或全量换液。及时清除代谢废物，补充新鲜营养。

状态观察：每日在显微镜下观察细胞形态；发现细胞体积增大、形态不规则时，可能是分化征兆。

4. 收获与检测：数据做决策

收获时间：通常培养4-6天可达扩增峰值。可通过流式细胞术定期（如第0、3、6、9天）检测CD34⁺细胞比例及绝对数量，以确定最佳收获点。

功能验证：进行CFU（集落形成单位） assay，验证扩增后的细胞是否保有长期多系分化潜能。